Détection de la sécrétion d’IFN-γ par les cellules T prélevées avant et après un traitement réussi de la maladie de Lyme précoce

Les sérodiagnostics actuels pour la maladie de Lyme manquent de sensibilité au début de la maladie et ne permettent pas de déterminer la réponse au traitement Nous avons évalué un test basé sur la technologie QuantiFERON utilisant des antigènes peptidiques dérivés de Borrelia burgdorferi pour stimuler la libération d’interféron-gamma IFN-γ en sérodiagnostic. Méthodes de la maladie de Lyme Le sang a été prélevé chez des patients atteints d’érythème migrant avant n = et mois après n = traitement antibiotique. La libération d’IFN-γ a été mesurée par immuno-enzymatique ELISA après une nuit de stimulation du sang total avec les antigènes peptidiques. des dosages sérologiques standard C, ELISA et Western blotResults La libération d’IFN-γ a été observée dans le sang prétraitement de% des patients atteints de la maladie de Lyme Après traitement antibiotique, IFN-γ était significativement réduit P =, et n’était détectable que chez% des patients initialement positifs En revanche, les anticorps anti-C ont été détectés dans p Les réponses anticorps ont persisté et augmenté après le traitementConclusions Nos résultats suggèrent que la mesure de l’IFN-γ après incubation du sang avec les antigènes de Borrelia pourrait être utile dans le diagnostic en laboratoire de la maladie de Lyme au début de la maladie de Lyme. En outre, après un traitement antibiotique, cette réponse semble être de courte durée

Borrelia burgdorferi, IFN-γ, maladie de Lyme, lymphocyte T, test de libération des cytokinesLa détection des anticorps dirigés contre Borrelia burgdorferi est la méthode standard pour le diagnostic de la maladie de Lyme en utilisant des lysats entiers de Borrelia, des mélanges de protéines recombinantes ou des antigènes peptidiques spécifiques. Par exemple, C, PepC comme cibles de test , les tests sérologiques actuels dépassent rarement une sensibilité de% dans la détection positive d’anticorps en début de maladie. Ces tests de détection d’anticorps ne fournissent pas d’informations précises sur la réponse au traitement. rester élevé pendant des années après que l’infection a été éliminée De nouvelles approches sont donc nécessaires pour surmonter les lacunes des tests sérologiques actuelsAntigène spécifique activation des cellules T est généralement initié peu après l’infection La population cellulaire en expansion sécrète des cytokines qui, entre autres activités, entraîne le développement d’une réponse immunitaire mature Suite à la résolution de l’infection, la réponse des lymphocytes T diminue, ce qui entraîne une diminution de la sécrétion des cytokines ou une diminution de la sécrétion des cytokines pro-inflammatoires et une contraction rapide de la population de lymphocytes T activés. méthodes d’analyse sérologique traditionnelles, en particulier parce que les résultats peuvent fournir des informations plus précises sur la présence d’une infection active par rapport aux réponses d’anticorps.Les premières tentatives pour évaluer l’utilité de la surveillance des lymphocytes T chez les patients atteints de la maladie de Lyme. Les chercheurs ont montré que les cytokines, y compris l’interféron gamma IFN-γ, inhibent la prolifération des lymphocytes T sous l’influence de la prolifération des lymphocytes T. certaines conditions , ce qui réduirait à son tour l’utilité de la prolifération en tant que marqueur de l’infection D’un autre côté, Forsberg et al ont démontré que la détection de l’IFN-γ fournit des informations pertinentes sur le plan diagnostique pour confirmer la maladie neurologique de Lyme, tandis que Jin et al ont rapporté que les cellules T activées des patients atteints de la maladie de Lyme ont produit IFN-γ suite à une stimulation ex vivo avec la protéine liant la décorine A, la protéine de surface externe C OspC, p ou la lipoprotéine de séquence vmp-like ED malgré ces résultats, l’utilité clinique d’un test L’immunité des lymphocytes T pendant la maladie de Lyme n’a pas été entièrement évaluée Nous avons évalué un test basé sur la technologie QuantiFERON pour détecter l’infection par Mycobacterium tuberculosis, afin de détecter la sécrétion d’IFN-γ dans le sang entier des patients atteints de la maladie de Lyme. des antigènes B de la borrélie, de la protéine de liaison de la décorine B DbpB, de l’OspC et de la flagelline kDa Nous avons comparé les résultats, avant et après traitement tibiotique, à ceux obtenus en utilisant un test immuno-enzymatique standard C-ELISA et la maladie de Lyme disponible dans le commerce Western blot

MATÉRIAUX ET MÉTHODES

Antigènes peptidiques

Des séquences entières de p, DbpB, flagelline et OspC de la souche B de Burgdorferi sensu stricto ont été alignées avec d’autres espèces de Borrelia en utilisant l’outil de recherche d’alignement local basique de protéine BLASTp sur le site Web du National Center Biotechnology Information. sont exprimés en début de maladie OspC est une surface majeure B burgdorferi au début de la maladie de Lyme , et les autres protéines sont exprimées constitutivement [,,] par le spirochète En outre, les résultats préliminaires des patients atteints de la maladie de Lyme combinaison de peptides allant des acides aminés a été générée à partir des régions des antigènes qui ont été hautement conservés parmi les espèces de Borrelia> et également distinctes des protéines non Borrelia <% identité Les peptides ont été dissous et ajustés à une concentration de mg / mL avant de préparer un cocktail de réserve contenant μg / mL de chaque peptide dans une solution saline tamponnée au phosphate pH

Patients et contrôles

Le sang total a été prélevé chez des patients adultes âgés de ≥ 1 an avec une maladie de Lyme précoce diagnostiquée par un médecin, caractérisée par des antécédents d’exposition aux tiques et / ou des lésions cutanées EM plus érythème migrans. anaplasmose, confirmée par un test de polymérase en chaîne positive test sanguin au système de santé Gundersen Les sujets atteints de la maladie de Lyme précoce ou l’anaplasmose ont été traités avec mg de doxycycline deux fois par jour pendant un minimum de jours Les volontaires âgés de ≥ ans qui résidaient dans les foyers de la maladie de Lyme au Wisconsin n = ou au Maryland n = et qui n’avaient pas d’antécédents de maladie de Lyme étaient aussi inclus comme témoins Un consentement éclairé a été obtenu avant l’inscription et les protocoles ont été approuvés par Gundersen Health Comité de révision institutionnelle du système Chaque sujet de la maladie de Lyme a rempli un questionnaire qui a documenté l’épidémie logy, histoire de morsure de tique, et durée et sévérité des manifestations cliniques Chaque sujet de la maladie de Lyme a été également interrogé juste avant l’aspiration de sang de convalescence pour confirmer la résolution satisfaisante des symptômes liés à la maladie de Lyme

Collecte et traitement du sang

Des prélèvements sanguins chez des sujets atteints de EM, maladie de Lyme précoce, ont été recueillis lors du prétraitement de présentation et environ jours après avoir suivi un traitement par doxycycline. Des échantillons sanguins de volontaires sains ou de patients atteints d’anaplasmose ont servi de témoins. des tubes; le tube a été aliquoté en volumes -mL qui ont ensuite été transférés dans des tubes stériles stériles sans pyrogène qui étaient soit vides vides, préchargés avec un mitogène, ou préchargés avec un volume de -μL du pool de peptides μg / mL de chaque concentration finale peptidique. puis mélangé soigneusement et incubé pendant – heures à ° C Le tube de sang restant a été centrifugé g pendant des minutes, et le plasma séparé a été stocké à – ° C jusqu’à ce que testé

Détection de l’IFN-γ

Après incubation, le plasma sanguin provenant des tubes de prélèvement sanguin a été recueilli par centrifugation à g pendant quelques minutes, et la quantité d’IFN-y dans le plasma a été déterminée en utilisant le QuantiFERON ELISA Qiagen, Germantown, Maryland comme indiqué par le fabricant. des échantillons ont été rapportés en unités internationales UI / mL par rapport à une courbe standard préparée en testant des dilutions d’un IFN-γ humain recombinant. L’échantillon nul a été utilisé pour ajuster la réactivité de fond provoquée par l’anticorps hétérophile ou IFN-γ non spécifique; la réactivité du tube zéro a été soustraite de la valeur IFN-γ obtenue en utilisant l’échantillon de sang du sujet. L’échantillon de mitogène a été utilisé comme témoin positif pour assurer l’intégrité des lymphocytes dans l’échantillon de sang.

C ELISA

Le peptide C CMKKDDQIAAAMVLRGMAKDGQFALK a été synthétisé avec une pureté de% avec des extrémités terminales amine biotinylée GenScript, Inc, Piscataway, New Jersey, et l’ELISA a été réalisé comme décrit précédemment. Les valeurs seuils significatives ont été déterminées en testant des échantillons sériques archivés de volontaires normaux sans précédent. suspicion de maladie de Lyme n =, sérums contenant du facteur rhumatoïde n = ou anticorps antinucléaires n =, et sérums de patients infectés par le virus Epstein-Barr n =, cytomégalovirus n =, syphilis n =, fièvre pourprée des montagnes Rocheuses n =, Borrelia hermsii récurrente fièvre n =, ou anaplasmose n = La densité optique moyenne OD a été calculée et les valeurs OD ≥ écart-type au-dessus de l’immunoglobuline moyenne M [IgM] ≥, immunoglobuline G [IgG] ≥ ont été considérées significatives Les valeurs seuils ont permis de détecter les anticorps IgG dans le sérum d’un patient présentant des anticorps antinucléaires et une fièvre récurrente Des contrôles sériques positifs et normaux ont également été inclus sur chaque E Plaque LISA

Western Blotting

La réactivité de Western blot a été détectée par un kit disponible dans le commerce Marblot, Trinity Biotech, Carlsbad, Californie selon les recommandations du fabricant. Les critères de confirmation sérodiagnostique de la maladie de Lyme recommandés par les Centers for Disease Control and Prevention : au moins des bandes protéiques, ou détectées; pour les IgG: au moins des bandes protéiques,,,,,,,,, ou détectées

Analyses statistiques

Le test de la somme des rangs de Wilcoxon a été utilisé pour examiner les résultats, et les valeurs P ≤ ont été considérées comme significatives

RÉSULTATS

Participants à l’étude

Tableau Vingt-sept des patients sont retournés pour fournir un échantillon de sang convalescent environ des mois après la fin de l’antibiothérapie. Les sujets avaient une n = ou plusieurs n = lésions EM. qui répondait au critère de surveillance CDC & gt; -cm lésion ronde rouge avec ou sans clairière centrale, et les patients avaient enlevé un Ixodes scapularis n = ou non identifié n = tique dans les semaines précédant le développement de la lésion cutanée. plaintes Les anomalies les plus fréquentes chez les patients restants étaient les céphalées n =, le cou raide n = et la myalgie n = Chaque patient a complété un minimum de jours de thérapie à la doxycycline, ce qui a entraîné l’arrêt complet des anomalies cliniques et constitutionnelles; aucun patient n’a signalé de symptômes anormaux pendant la visite de convalescence

Tableau Épidémiologie et signes / symptômes cliniques des patients atteints de la maladie de Lyme précoce No Sexe Age, y Documented & lt; wk Tique Morsure Durée de la maladie, d Erythème Migrans Lésions Autres Plaintes / Malformations M Oui cerf tique Dos simple Maux de tête F Non Dos unique Maux de tête, fièvre, fatigue, myalgie M Non Cuisse unique Maux de tête, frissons, fatigue, arthralgie M Oui cerf tique Maux de tête, raideur de la nuque, myalgie, arthralgie M Oui cerf tique Arthralgie F Oui cerf tique Cuisse simple Aucun M Oui cerf tique Dos unique Maux de tête Maux de tête, fièvre, fatigue, raideur M Oui cerf tique Dos unique Fatigue, myalgie M Oui cerf tique tronc Maux de tête, fièvre, raideur de la nuque, fatigue, myalgie F Oui cerf tique Poitrine unique Maux de tête, fièvre, raideur de la nuque, myalgie M Oui Cerf tique Une hanche Maux de tête, raideur, myalgie M Oui non identifié Jambe unique Aucun F Oui non identifié fièvre, fatigue, myalgie, arthralgie M Oui cerf tique Tronc unique Mal de tête, fièvre, raide cou, myalgie, arthralgie F Non Abdomen simple Lymphadénopathie F Oui non identifié Simple abdomen Maux de tête, fièvre, fatigue, myalgie, arthralgie M Oui non identifié Maux de tête Maux de tête, raideur de la nuque, fatigue, arthralgie M Oui non identifié Maux de tête Maux de tête, raideur de la nuque, fatigue, arthralgie F Oui non identifié Aine simple Maux de tête, fièvre, fatigue F Non Epaule Maux de tête, raideur de la nuque, fatigue M Oui cerf tique Dos simple Maux de tête, fièvre, raideur de la nuque, arthralgie, myalgie M Oui non identifiée épaule unique Maux de tête, fatigue F Non Maux de tête raideur de la nuque, arthralgie, myalgie M Non Maux de dos Maux de tête, fièvre, raideur de la nuque, myalgie, arthralgie M Non abdomen Maux de tête, fièvre, raideur de la nuque, myalgie, arthralgie M Non Maux de tête, raideur, fatigue, myalgie M Oui cerf tique Tronc multiple Fièvre, fatigue M Non Bras multiples, torse Headach e, fièvre, raideur de la nuque, arthralgie, myalgie M Non Cuisse multiple, aine Maux de tête, fièvre, raideur de la nuque, arthralgie, myalgie Sujet Non Sexe Âge, y Documenté & lt; wk Tique Morsure Durée de la maladie, d Erythème Migrans Lésions Autres Plaintes / Malformations M Oui cerf tique Dos simple Maux de tête F Non Dos unique Maux de tête, fièvre, fatigue, myalgie M Non Cuisse unique Maux de tête, frissons, fatigue, arthralgie M Oui cerf tique Maux de tête, raideur de la nuque, myalgie, arthralgie M Oui cerf tique Arthralgie F Oui cerf tique Cuisse simple Aucun M Oui cerf tique Dos unique Maux de tête Maux de tête, fièvre, fatigue, raideur M Oui cerf tique Dos unique Fatigue, myalgie M Oui cerf tique tronc Maux de tête, fièvre, raideur de la nuque, fatigue, myalgie F Oui cerf tique Poitrine unique Maux de tête, fièvre, raideur de la nuque, myalgie M Oui cerf tique Hanche simple Maux de tête, raideur, myalgie M Oui non identifié Jambe unique Aucun F Oui non identifié fièvre, fatigue, myalgie, arthralgie M Oui cerf tique Tronc unique Mal de tête, fièvre, raide cou, myalgie, arthralgie F Non Abdomen simple Lymphadénopathie F Oui non identifié Simple abdomen Maux de tête, fièvre, fatigue, myalgie, arthralgie M Oui non identifié Maux de tête Maux de tête, raideur de la nuque, fatigue, arthralgie M Oui non identifié Maux de tête Maux de tête, raideur de la nuque, fatigue, arthralgie F Oui non identifié Aine simple Maux de tête, fièvre, fatigue F Non Epaule Maux de tête, raideur de la nuque, fatigue M Oui cerf tique Dos simple Maux de tête, fièvre, raideur de la nuque, arthralgie, myalgie M Oui non identifiée épaule unique Maux de tête, fatigue F Non Maux de tête raideur de la nuque, arthralgie, myalgie M Non Maux de dos Maux de tête, fièvre, raideur de la nuque, myalgie, arthralgie M Non abdomen Maux de tête, fièvre, raideur de la nuque, myalgie, arthralgie M Non Maux de tête, raideur, fatigue, myalgie M Oui cerf tique Tronc multiple Fièvre, fatigue M Non Bras multiples, torse Headach e, fièvre, raideur de la nuque, arthralgie, myalgie M Non Cuisse multiple, aine Mal de tête, fièvre, raideur de la nuque, arthralgie, myalgie View Large

Détection d’anticorps anti-C et réactivité de Western blot

Des anticorps anti-C ont été testés sur des échantillons sériques aigus et convalescents. Des anticorps anti-C ont été détectés dans les sérums de prétraitement sur un total de% de patients, avec% de patients positifs pour les anticorps IgM et% de patients positifs pour les anticorps IgG. sérums de post-traitement de mois, IgM anti-C sont restés élevés chez les patients et ont baissé à un niveau indétectable chez les patients précédemment positifs, et séroconvertis précédemment négatifs aux IgM. Les IgG anti-C ont augmenté dans la convalescence et ont été détectés dans% des patients post-traitement En revanche, la sensibilité aux Western blot IgM et IgG était très faible dans les sérums prétraitement et convalescents. Bien que les blots Western et IgM détectaient des anticorps qui se liaient au moins à des protéines chez de nombreux sujets, seuls% sujets développaient des réponses d’anticorps suffisamment Critères recommandés par le CDC bandes de Western blot minimum d’IgM ou d’IgG pour la sérologie Dans la majorité des cas, les taux d’anticorps détectés par le test ELISA C ou le Western blot sont demeurés élevés ou ont augmenté malgré l’antibiothérapie appropriée et la résolution de la maladie de Lyme avant l’antibiothérapie. anomalies cliniques

Tableau Détection des anticorps anti-C dans le prétraitement de sérum maladie de Lyme précoce pré-traité ou mois après le traitement antibiotique sujet Significanta / – Niveaux d’anticorps anti-C détectés: prétraitement mo Post-traitement IgM IgM IgM IgM IgG – – – – – – – – – – – – – – – – – – – – – – – – – – – – – – – – – – – – – – – – – – NT NT – – – – – – – – – – – – – – – – NT NT Total, No% Sujet Significanta / – Niveaux d’anticorps anti-C détectés: Prétraitement Mo Post-traitement IgM IgM IgM IgM IgG – – – – – – – – – – – – – – – – – – – NTN – – – – – – – – – – – – – – – – – – – – – – % Abréviations: IgG, immunoglobuline G; IgM, immunoglobuline M; NT, non testéa Significatif se réfère à ≥ écart-type IgM & gt; , IgG & gt; au-dessus de la valeur de densité optique moyenne des sérums de volontaires normaux n =, sérums avec facteur rhumatoïde n = ou anticorps antinucléaires n =, et sérums de patients avec virus Epstein-Barr n =, cytomégalovirus n =, syphilis n =, fièvre pourprée des montagnes Rocheuses n =, Borrelia hermsii fièvre récurrente n =, ou anaplasmose n = View Large

Tableau Confirmation de la maladie de Lyme précoce par Western Blot Sujet Western Blot Positivitya / – Prétraitement Mo Post-traitement des bandes IgM Bandes IgG Bandes IgM Bandes IgG – – – – – – – – – – – -,, – -, – – – – – – – – – – -,, – – – -,,,,,,, – – – -,, – -, – – – – – – – – – – -, -,, -,,,, – – – – – – – – – NT NT – – – – – -,, – -,,,, -,,,,, – -,,, -,,, – – – – – -,,,,, -,,,,,,,,,,,,, – – – -,,,,, NT NT,, -,,, – -, Total, Non % Sujet Western Blot Positivitya / – Prétraitement mo Post-traitement Bandes IgM Bandes IgG Bandes IgM Bandes IgG – – – – – – – – – – – – -,, – -, – – – – – – – – – – -,,, , -, – -,,,,, – – – -,, – -, – – – – – – – – – – – -, -, -,,,, – – – – – – – – – NT NT – – – – – -,,,,,,, -,, – -,,, -,,, – – – – -,,, -, , -, -,,,,,,,,,,, – NT, -,,,, -,, Total, No% Abréviations: IgG, immunoglobuline G; IgM, immunoglobuline M; NT, non testéa Résultat positif basé sur les critères des Centres de Contrôle et de Prévention des Maladies pour la positivité au Western blot: IgM au moins des,, ou bandes, et IgG au moins de,,,,,,,,, ou bandsView Large

Réponses IFN-γ avant et après l’antibiothérapie

Une valeur de référence pour la sécrétion d’IFN-y a d’abord été déterminée en incubant le sang entier de volontaires sains n = et de patients atteints d’anaplasmose n = IFN-γ moyen = UI / mL [plage, – IU / mL]; Tableau supplémentaire Une valeur seuil positive a été établie en calculant les écarts-types au-dessus de la moyenne des valeurs de contrôle ≥ IU / mL. Nous avons ensuite déterminé les niveaux d’IFN-γ libérés après une nuit de culture de sang total incubé avec le cocktail d’antigènes Borrelia. des patients atteints de la maladie de Lyme précoce% ont produit des niveaux significatifs ≥ IU / mL d’IFN-γ avant le traitement avec des antibiotiques Tableau L’ampleur des réponses variait largement parmi les patients, IU / mL ± UI / mL Fait intéressant, les taux d’IFN -γ n’a pas de corrélation étroite avec le nombre de lésions EM simples vs multiples ou la sévérité des manifestations cliniques / constitutionnelles et seulement des échantillons sanguins% contrôle, tous provenant de donneurs sains, ont produit des niveaux significatifs de IFN-γ moyenne, UI / mL [plage, – IU / mL]

Tableau Détection de l’interféron gamma dans des échantillons sanguins de patients ayant un prétraitement précoce de la maladie de Lyme ou des mois de post-traitement avec des niveaux de doxycycline IU / mL d’IFN-γ dans des échantillons de sang prélevés a Prétraitement b b b b b b b b b b b b b b b b NT b b b NT b b b Niveaux du sujet IU / mL d’IFN-γ dans les échantillons de sang prélevés a Prétraitement mo Post-traitement b b b b b b b b b b b b b b b b b b b b b b NT b b b Abréviations: IFN-γ, interféron gamma; NT, non testéa Les valeurs affichées sont la valeur IFN-γ obtenue à partir de la stimulation peptidique des échantillons de sang total moins la réactivité des tubes nuls Tableau supplémentaire b Les résultats sont ≥ écarts-types supérieurs à la valeur moyenne ≥ IU / mL de n = normale et anaplasmose le groupe EM fournissant un échantillon de sang convalescent après un traitement antibiotique, la réponse IFN-γ a été diminuée n = ou n’est plus significative n = dans ceux qui étaient auparavant positifs P =; Tableau et figure Le taux d’IFN-γ est resté similaire chez les patients de retour seulement dont le prélèvement sanguin avant traitement a donné un résultat positif, alors que les taux restaient indétectables chez les sujets% qui ne produisaient pas des niveaux significatifs d’IFN-γ avant le traitement. aux réponses d’anticorps détectées par le test ELISA C ou Western blot, les niveaux diminués ou l’incapacité à détecter l’IFN-γ étaient étroitement corrélés avec la résolution des symptômes précoces de la maladie de Lyme après le traitement.

Figure Vue largeDownload de l’interféron gamma IFN-γ dans des échantillons de sang recueillis environ mois après traitement de patients atteints de la maladie de Lyme précoce avec IFN-γ positif avant la colonne de traitement antibiotique AFigure View largeDownload slideDétection de l’interféron gamma IFN-γ dans les échantillons de sang prélevés environ mois après le traitement de patients atteints d’une maladie de Lyme précoce avec un IFN-γ positif avant la colonne A de traitement antibiotique

DISCUSSION

n dépendait de l’incubation avec les antigènes peptidiques, nous supposons que les cellules T CD ou CD étaient la source primaire de la cytokine, mais des études supplémentaires sont nécessaires pour confirmer cette hypothèse que la sécrétion d’IFN-γ variait largement parmi les patients; Cependant, les taux d’IFN-γ ne sont pas non plus étroitement corrélés avec l’ampleur de l’infection cutanée unique ou multiple EM ou le nombre et la gravité des signes / symptômes cliniques anormaux. Niveaux d’IFN-γ dans les tubes nuls étaient similaires pour les deux patients avec simple et ceux avec plusieurs EM Tableau supplémentaire; ainsi, l’absence de différence entre les groupes n’est pas attribuable à des différences dans l’IFN-γ de base. La signification de ceci n’est pas claire; Cependant, cette étude ne comprenait qu’un petit nombre de patients résidant dans la même région géographique. Le test de détection IFN-γ et C ELISA ont produit des résultats similaires dans la détection des maladies précoces, le test de libération d’IFN-γ étant légèrement plus sensible% vs% Les deux dosages étaient significativement plus sensibles que le Western blot% pour la détection des maladies précoces Bien que le taux de détection global était similaire pour le test ELISA C et l’IFN-γ, l’analyse des patients individuels a révélé que les résultats des analyses divergeaient souvent, les patients étaient positifs uniquement pour les anticorps anti-C ou seulement IFN-γ Une explication simple de cette divergence est que les tests utilisaient des antigènes cibles distincts cavité. Cela suggérerait également que l’inclusion d’antigènes supplémentaires dans le test de libération d’IFN-γ pourrait donner une sensibilité encore plus élevée En fait, la combinaison des résultats positifs du test ELISA C et de l’IFN-γ augmente la sensibilité de la confirmation de la maladie de Lyme précoce De plus, nous avons démontré que les réponses d’anticorps détectées par le test ELISA C ou Western blot persistaient ou continuaient à augmenter, même après que les sujets aient été traités avec succès par un régime approprié de doxycycline Kowalski et al. ] a montré de façon convaincante dans une grande étude clinique que l’évolution de la doxycycline échouait rarement à résoudre efficacement la maladie de Lyme précoce. Cette découverte confirme donc les rapports précédents documentant l’incapacité de la sérologie à fournir une prédiction précise du traitement réussi. ont également montré que les taux d’IFN-γ diminuaient après un traitement antibiotique réussi et, en fait, la réponse disparaissait complètement chez la plupart des patients atteints de la maladie de Lyme précoce quelques mois après la fin du traitement. Les diminutions d’IFN-γ n’étaient pas attribuables à augmentation de la production initiale d’IFN-γ dans les échantillons de convalescence, en tant que niveaux d’IFN-γ dans le prétraitement et après Des études supplémentaires sont nécessaires pour évaluer de manière plus critique la capacité de la sécrétion d’IFN-γ à fournir une prédiction précise de l’infection active Glickstein et al ont rapporté des niveaux accrus de sécrétion d’IFN-γ par les cellules mononucléaires du sang périphérique collectées immédiatement après Cependant, les méthodologies utilisées dans cette étude étaient sensiblement différentes de celles utilisées ici, ce qui peut contribuer à la différence dans les réponses observées. Par conséquent, une évaluation plus complète qui inclut des points de temps plus tôt est nécessaire pour confirmer quand la réponse IFN-γ commence à décliner suite à une antibiothérapie Malgré ces résultats prometteurs, plusieurs insuffisances doivent être soulignées. Par exemple, nous n’avons testé qu’un petit nombre de patients atteints de la maladie de Lyme, les patients résidant dans une seule région géographique, les patients pour des jours plutôt que des semaines, et le c De plus, nous avons établi une valeur seuil significative en utilisant seulement des sérums normaux provenant de patients résidant uniquement dans des foyers de maladie de Lyme et un petit nombre de sujets présentant une anaplasmose. Des patients présentant d’autres maladies avec des manifestations cliniques similaires à celles La maladie de Lyme et les patients présentant des infections bactériennes et virales potentiellement réactives croisées devraient également être évalués dans le cadre de futures études. De plus, le cocktail de peptides spécifiques de Borrelia a été choisi uniquement parmi les protéines; d’autres antigènes peptidiques peuvent être importants. Par conséquent, des études supplémentaires visant à définir de façon plus critique des valeurs limites significatives, à déterminer les effets d’autres antigènes peptidiques et à évaluer des sujets atteints de la maladie de Lyme localisée et disséminée restent nécessaires. fournir des preuves solides que la détection de la sécrétion d’IFN-γ après incubation du sang total avec les antigènes Borrelia offre une promesse considérable pour augmenter la sensibilité du diagnostic de laboratoire de la maladie de Lyme précoce. Les résultats fournissent également des preuves préliminaires convaincantes que la réponse cytokine peut être de courte durée.

Remarques

Remerciements Nous remercions le Dr Peter Haviernik et John Wolff pour leur aide précieuse dans la collecte et le traitement des échantillons de sang normaux; Shelly Clements pour l’aide à la collecte et au traitement des échantillons de la maladie de Lyme et à la coordination de la logistique; et le Dr Andrew Borgert pour les analyses statistiques soutien financier Ce travail a été soutenu par Qiagen, Inc RJD et PMA ont également été pris en charge par l’Institut national des allergies et des maladies infectieuses à la National Institutes of Health numéro de subvention R AIPotential conflits d’intérêts MM et JB sont employés par Qiagen, Inc SMC et RJD fournissent des services de conseil pour Qiagen, Inc RJD et PMA ont des brevets pertinents qui pourraient servir de source pour le financement de la recherche future Tous les autres auteurs ne signalent aucun conflit potentiel Tous les auteurs ont soumis le formulaire ICMJE pour la divulgation des conflits d’intérêts potentiels Les conflits que les éditeurs jugent pertinents pour le contenu du manuscrit ont été divulgués